uji hidrolisa pati dan gelatin
1. Uji hidrolisa gelatin
Gelatin
adalah suatu zat yng meleleh pada atau di atas 28oC, sehingga harus dibudidayakan
di suhu 25oC (suhu kamar) Hidrolisis gelatin terjadi karena bakteri
menghasilkan gelatinase untuk menghidrolisis polimer protein, gelatin, untuk
asam amino.Setelah melakukan percobaan maka kita akan mengetahui bakteri apa
saja yang bisa menghidrolisis gelatin, Sampel bakteri yang digunakan untuk uji
hidrolisis gelatin adalah Bacillus sp. Hidrolisis gelatin : protein yang
diproduksi oleh hidrolisis parsial dari kolagen diekstrak dari tulang, jaringan
ikat, organ dan beberapa usus hewan peliharaan seperti sapi, babi, dan kuda.
(Wikipedia)
·
Kolagen memiliki komposisi asam amino
yang tidak biasa yang membuatnya tahan terhadap protease dan dengan demikian
organisme dapat mengeluarkan protease yang menghidrolisis kasein( tidak menunjukkan
aktivitas gelatinase.)
·
Media gelatin digunakan untuk menguji
apakah bakteri dapat mencerna protein gelatin. Untuk mencerna gelatin, bakteri
memerlukan enzim gelatinase. Untuk menyuntik media ini, gunakan jarum transfer
untuk menusuk gelatin.
·
Tabung harus benar-benar dingin sebelum
pengamatan.Jika media padat setelah pendinginan berarti bakteri tidak mencerna
gelatin. Jika media cair bahkan setelah pendinginan, maka hasil tes positif
berarti bakteri mampu mencerna gelatin.
·
Gelatin protein merupakan polimer besar
asam amino yang terlalu besar untuk masuk ke dalam membrane sel. Dalam rangka
memanfaatkan gelatin, exoenzim proteolitik bakteri mensekresi gelatinase dan
peptidase untuk mencerna gelatin luar sel.
·
Beberapa spesies bakteri yang
mengeluarkan gelatinase : Staphylococcus aureus, beberapa spesies Clostridium,
Propinobacterium acnes, beberapa anggota Enterobacteriaceae, beberapa
Pseudomonadaceae dan anggota Bacillus , Serratia , Proteus.
2. uji hidrolisa pati
Pati
adalah polisakarida yang muncul sebagai polimer bercabang dari glukosa gula
sederhana. Ini berarti pati yang benar-benar serangkaian molekul glukosa
tersambung bersama untuk membentuk rantai panjang. Beberapa bakteri mampu
menggunakan pati sebagai sumber karbohidrat namun untuk melakukan ini, mereka
harus terlebih dahulu menghidrolisis atau memecah pati sehingga dapat masuk ke
dalam sel. Bakteri mengeluarkan sebuah exoenzyme yang menghidrolisis pati
dengan memecah ikatan antara molekul-molekul glukosa.Enzim ini disebut sebuah
diastase. Glukosa kemudian dapat masuk bakteri dan digunakan untuk metabolisme.
·
tes ini digunakan untuk mengidentifikasi
bakteri yang dapat menghidrolisis pati (amilosa dan amilopektin) dengan
menggunakan enzim amilase-dan oligo-1 ,6-glukosidase.
·
Sering digunakan untuk membedakan
spesies dari genus Clostridium dan Bacillus. l. Karena ukuran besar molekul
amilosa dan amilopektin, organisme ini tidak dapat melewati dinding sel bakteri.
·
untuk menggunakan pati sebagai sumber
karbon, bakteri harus mengeluarkan amilase-dan oligo-1 ,6-glukosidase ke ruang
ekstraseluler. Enzim ini memecah molekul pati menjadi glukosa subunit yang
lebih kecil yang kemudian dapat masuk langsung ke jalur glikolisis.
·
untuk menginterpretasikan hasil uji
hidrolisis pati, yodium harus ditambahkan ke dalam pati agar, yodium bereaksi
dengan pati membentuk warna coklat tua.
·
hidrolisis pati akan menciptakan zona
bening disekitar pertumbuhan bakteri.(Bacillus.Subtilis) positif untuk
hidrolisis pati.
·
Amilase adalah enzim yang menghidrolisis
pati, polimer glukosa, menjadi monomer yang kemudian dapat diangkut ke dalam
sel. Dalam beberapa kasus, bakteri bisa memproduksi atau menyimpan pati, dalam
hal ini bakteri akan berwarna gelap.
·
Sifat-sifat pati agar-agar terkait
dengan isinya seperti ekstrak daging sapi ,pati terlarut dan agar-agar
·
Beef ekstrak menyediakan nitrogen,
vitamin, karbon dan asam amino, sedangkan agar-agar adalah agen solidifying.
Ini
adalah media diferensial digunakan untuk menentukan apakah suatu bakteri dapat
menggunakan pati sebagai sumber karbon dan sumber energi.
http://chaterinaryan.blogspot.com/2011/05/uji-hidrolisis-pati-bakteri-pada-media.html
